Élimination du glycérol de la semence décongelée de coq par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique

La cryoconservation des spermatozoïdes est une méthode cruciale dans la conservation de la biodiversité des espèces et des races, mais aussi pour assurer la restauration des lignées lors de catastrophes sanitaires. Actuellement, le glycérol est l’agent cryoprotecteur le plus utilisé pour la cryoconservation des spermatozoïdes de coq, étant le plus efficace dans le maintien des fonctions du spermatozoïde, mais il est associé à un taux de réussite faible voir une totale stérilité lors de l’insémination. Par conséquent, nous cherchons à développer une méthode simple d’élimination du glycérol par centrifugation dans un gel colloïdal synthétique, le Percoll®. Après collecte, la semence de coqs a été congelée en glycérol 11% en paillettes avec un congélateur programmable. Lors de la décongélation, la semence a été déposée sur une solution de sucrose (200 mM) en présence de Percoll® (Solution Sucrose-Percoll®, SSP) dans du PBS puis centrifugée 15 min. Afin de définir les meilleures conditions, différentes concentrations de SSP (40, 50, 60 ou 70%) ainsi que deux températures (4 ou 20°C) ont été testées. La concentration de glycérol et la mobilité individuelle des spermatozoïdes ont été évaluées après centrifugation respectivement par le kit Glycerol Assay et par Computer-Assisted Sperm Analysis system (CASA). Nos données montrent que toutes les concentrations de SSP réduisent la présence de glycérol à moins de 120 mM (soit une élimination de 94% du glycérol initial). La centrifugation à 20°C permet une bonne sélection des spermatozoïdes mobiles et progressifs, en particulier pour SSP 40 et 70%. Notre nouvelle méthode permet donc d’éliminer efficacement le glycérol des semences de coq cryopréservées tout en sélectionnant les spermatozoïdes présentant une bonne mobilité. Comparée à la méthode conventionnelle de dilutions successives, elle permet de gagner 44% de temps de traitement des échantillons lors de l’élimination du glycérol.